亲和层析:使用含有His-tag的PSG2蛋白,可以通过Ni-NTA亲和层析进行初步纯化。 平衡柱:用平衡缓冲液(如含有20 mM Imidazole的PBS)平衡Ni-NTA层析柱。 上样:将上清液通过层析柱,结合His-tag的PSG2蛋白会被特异性捕获。 洗涤:用洗涤缓冲液(如含有20-50 mM Imidazole的PBS ...
诱导后收集细胞(4°C,12,000 rpm,10分钟离心)。 用冷的PBS或裂解缓冲液(如50 mM Tris-HCl,300 mM NaCl,10 mM imidazole,pH 8.0)重悬菌体。 加入蛋白酶抑制剂混合物(如PMSF)以防止蛋白降解。 在冰浴中使用超声破碎仪超声裂解细胞,超声条件为10秒超声,30秒间隔 ...